大鼠骨髓间充质干细胞体外培养方法的改进

• 作者: 李宁 李艳菊 胡亮杉 胡海燕 郭坤元
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 间充质干细胞 大鼠 细胞培养
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 71-74
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 4249字
• 语种: 中文

摘要

背景:间充质干细胞在骨髓中的含量很低,需进行体外分离纯化和大量增殖.目的:优化骨髓间充质干细胞取材、纯化、扩增的方法,拟提高骨髓间充质干细胞的获得率和扩增率.设计、实施及地点:以细胞为对象的观察实验,于2007-03/2008-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室进行.材料:实验动物为6～8周龄清洁级雄性大鼠,体质量130～150 g.方法:采用改进的贴壁法培养骨髓间充质干细胞:保留大鼠肱骨、股骨和胫骨,尽量将骨周边组织剔除干净,从而减少混杂的细胞;冲洗骨髓腔时,选用2.5 mL的注射器,可以将紧贴骨髓腔壁的骨髓间充质干细胞吹洗下来,从而提升获得率;细胞换液时未全部倾去旧培养液,保留了1/4～1/5的旧培养液;采用"二传一"的方法将两瓶原代细胞分别消化后合为一瓶,保证传代时对细胞数目的要求,能避免细胞过度老化.主要观察指标:倒置光显微镜和苏术精-伊红染色进行细胞形态学观察,流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法和克隆形成实验测定细胞P1和P5生长曲线和克隆形成能力,用流式细胞仪和碱性磷酸酶对培养进行细胞鉴定.结果:分离的骨髓间充质干细胞人小较为均匀,基本上呈梭形或星形.原代培养细胞传代后,细胞增殖速度较快,基本上三四天传代1次,随传代次数的增加细胞形态趋于一致细胞基本为成纤维细胞型.流式细胞术证明G0G1期的细胞约占80%以上.细胞生长曲线测定表明接种后第3天细胞进入指数增生期,至第五天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢、克降能力降低.经流式细胞仪检测显示CD44、CD99阳性,CD45阴性,碱性磷酸酶试验为阳性.结论:采用改良的的方法获得了大量遗传性质均一、功能状态良好的骨髓间充质干细胞,并有效地提高了细胞的获得率和扩增率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭坤元	南方医科大学珠江医院血液科	138	688	13.0	16.0
2	胡亮杉	南方医科大学珠江医院血液科	21	102	6.0	9.0
3	李宁	南方医科大学珠江医院血液科	38	309	10.0	16.0
4	胡海燕	南方医科大学珠江医院血液科	46	140	6.0	8.0
5	李艳菊	南方医科大学珠江医院血液科	9	74	5.0	8.0