小鼠胚胎干细胞来源平滑肌细胞的鉴定及其功能分析

• 作者: 吴光哲 康建 李娜 田孝祥 闫承慧 陶杰 韩雅玲 齐岩梅
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 拟胚体 平滑肌细胞 分化 小鼠
• 年，卷（期）: 2009,（32）
• 所属期刊栏目: 干细胞培养与分化
• 页码范围: 6271-6275
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5571字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.32.013

摘要

背景:胚胎干细胞来源的平滑肌细胞是血管组织工程潜在的细胞来源之一,但这些细胞是否具有成熟平滑肌细胞的表型和功能仍不清楚.目的:对小鼠胚胎干细胞分化的甲滑肌细胞进行表型鉴定及功能分析.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-05/2008-12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成.材料:清洁级孕12.5 d昆明小鼠1只用于制备饲养层细胞,SD大鼠1只用干制备主动脉平滑肌细胞.小鼠胚胎干细胞系R1、小鼠微血管内皮细胞系由美国ATCC公司提供,转染pSPIE载体的胚胎干细胞R1由本实验室制备.方法:①诱导分化及筛选:用转染pSPIE载体的胚胎干细胞R1制备拟胚体,拟胚体悬浮培养5 d后贴壁培养1 d,第7天加入全反维甲酸诱导分化4 d,第11大用10 mg/L嘌呤霉素对诱导分化后的细胞筛选2 d.②表型鉴定:对筛选到的平滑肌细胞进行SM α-actin、SM22a、SM.MHC免疫荧光染色,以大鼠原代主动脉平滑肌细胞、未经筛选的第10天分化细胞作为对照,进行Western Blot分析.③收缩功能:10-5 mol/L卡巴可处理筛选到的平滑肌细胞30 min.④体外成血管功能:将等量的内皮细胞和筛选到的平滑肌细胞混合,在Matrigel上培养.主要观察指标:平滑肌细胞标志物的表达,平滑肌细胞的收缩,平滑肌细胞向内皮管腔样结构的募集.结果:分化的平滑肌细胞上要分布于贴壁生长的拟胚体的外周部位,胚胎干细胞来源的平滑肌细胞3种标志物SM α-actin、SM22a、SM-MHC免疫荧光染色均呈阳性表达,Western Blot结果显示其SM α-actin、SM22a表达水平与大鼠原代主动脉平滑肌细胞相似,高于未经筛选的第10天分化细胞.筛选剑的平滑肌细胞在10-5 mol/L卡巴可刺激下出现明显收缩,且能够募集到内皮管腔样结构周围.结论:小鼠胚胎干细胞来源的平滑肌细胞具有与成熟平滑肌细胞相似的表型和功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩雅玲	解放军沈阳军区总医院心内科	26	102	7.0	9.0
2	田孝祥	大连医科大学研究生院	2	2	1.0	1.0
3	康建	解放军沈阳军区总医院心内科	7	19	3.0	4.0
4	闫承慧	解放军沈阳军区总医院心内科	14	33	4.0	5.0
5	齐岩梅	解放军沈阳军区总医院心内科	3	2	1.0	1.0
6	李娜	解放军沈阳军区总医院心内科	1	2	1.0	1.0
7	陶杰	解放军沈阳军区总医院心内科	3	3	1.0	1.0