可溶性血管内皮细胞生长因子受体1真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

• 作者: 何力鹏 周仪华 王耀晟 程晓曙 鲍晓明 黄晓
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 可溶性血管内皮生长因子受体1 克隆 构建 转染
• 年，卷（期）: 2009,（41）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 8040-8043
• 页数: 4页
• 分类号: R392.114
• 字数: 3906字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.41.007

摘要

背景:研究表明,可溶性血管内皮生长因子受体Flt-1(sflt-1)基因在多种组织中表达,但其在内皮细胞中的表达尚待证实.目的:获取人sflt-1基因,构建sflt-l基因真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1重组质粒,检测其在人脐静脉内皮细胞中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-05/12在南昌大学第二附属医院分子中心完成.材料:pEGFP-N1真核表达载体为南昌大学第二附属医院分子中心保存,人脐静脉内皮细胞株购至南京基凯生物技术公司.方法:从含有目的基因的质粒克隆模板中,利用酶切的方法获得目的基因,将目的载体进行酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,PCR鉴定为阳性的克隆,证明目的基因已经定向连入目的载体.再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体.用脂质体法将pEGFP-N1/sflt-1重组质粒转染人脐静脉内皮细胞.主要观察指标:①重组质粒的酶切鉴定结果.②重组质粒的测序鉴定结果.⑧荧光显微镜及蛋白免疫印迹检测sflt-1基因在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果:①对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,与sflt-1基因片段全长2 063 bp理论值相符,证实pEGFP-N1/sflt-1重组质粒构建成功.②重组质粒送至上海捷瑞生物技术公司进行通测,测序结果证实插入片段序列与理论值完全一致.③荧光显微镜下可见重组质粒转染人脐静脉内皮细胞发绿色荧光,蛋白免疫印迹检测表明sflt-1基因能在人脐静脉内皮细胞中表达.结论:实验成功构建了携带人血管内皮生长因子受体Flt-1的重组pEGFP-N1/sflt-1真核表达质粒,并证实其在人脐静脉内皮细胞中的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程晓曙	南昌大学第二附属医院心内科	212	761	13.0	20.0
2	王耀晟	南昌大学第二附属医院心内科	12	34	4.0	4.0
3	周仪华	南昌大学第二附属医院心内科	12	33	4.0	5.0
4	黄晓	南昌大学第二附属医院心内科	12	19	2.0	3.0
5	鲍晓明	南昌大学第二附属医院心内科	5	15	2.0	3.0
6	何力鹏	南昌大学第二附属医院心内科	5	11	2.0	3.0