mdx鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养及向肌细胞的诱导分化

• 作者: 于美娟 卢锡林 尚延昌 张成 张雅妮 熊符 王淑辉 申本昌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 肌细胞 mdx鼠 分化
• 年，卷（期）: 2009,（14）
• 所属期刊栏目: 骨髓间充质干细胞培养与分化
• 页码范围: 2722-2726
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6124字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.14.023

摘要

背景:自体干细胞移植治疗可以克服异体干细胞移植治疗的局限性,但目前对于进行性肌营养不良模型mdx鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及肌分化潜能研究未见报道.目的:拟建立体外分离培养mdx鼠骨髓间充质干细胞的方法,并观察其成肌分化能力.设计、时间及地点:细胞学体外观察,丁2006-01/07在中山大学附属第一医院神经病学实验宅完成.材料:4～6周龄纯系雄性mdx鼠10只,购自美国Jackson实验室,饲养于中山大学北校区动物实验中心.碱性成纤维细胞生长因子和兔抗鼠MHC抗体为Chemicon公司产晶.方法:全骨髓法体外分离mdx鼠骨髓间充质干细胞,差速贴壁法纯化扩增,胰酶+EDTA消化传代.取传至第3代的细胞,按1×104/孔接种于24孔板,置于含两性霉素B、碱性成纤维细胞生长因子、胎牛血清的DMEM培养基中向肌细胞方向诱导分化,2周后更换为不含两性霉素B、但添加马血清的DMEM培养基继续培养2周.主要观察指标:鼠骨髓间充质干细胞形态、表面标志、生长曲线及成肌诱导分化.结果:原代培养24 h后,鼠骨髓间充质干细胞约80%贴壁生长,第3代细胞多旱梭形,形态比较均一.鼠骨髓间充质干细胞农达CD29和CD44等间质类细胞的表面分子,不表达CD11B和CD45等淋巴造血细胞的表面分子.接种后第一两天细胞处于潜伏期,第3天细胞增殖旺盛,进入对数生长期,至第4天细胞数增长一倍,第5天进入平台期.两性霉素B诱导后细胞有少量死亡,停用后更换马血清促进细胞成肌,7～10 d可见有肌管样细胞形成,免疫荧光染色可见肌管样细胞呈MHC阳性,DAPI复染后可见肌细胞内有多个细胞核.结论:在两性霉素B与马血清依次诱导条件下,体外可成功分离培养基因缺陷mdx鼠骨髓间充质干细胞,并证明其具有成肌分化潜能.