人脐血基质细胞的体外培养及向成骨细胞诱导分化

• 作者: 刘霞 秦书俭 罗美 马云胜
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 脐血基质细胞 体外培养 诱导 成骨
• 年，卷（期）: 2009,（19）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3703-3707
• 页数: 5页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.19.020

摘要

背景:研究证实婴儿脐带血里含有类似骨髓间充质细胞的细胞,但在培养过程中其成功率很低且难度高.目的:拟在体外分离培养人脐血基质细胞,并观察其分化潜能.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/2008-06在辽宁医学院中心实验室完成.材料:健康足月新生儿脐带血12份,每份30～60 mL,由锦州市妇婴医院提供.方法:取采集的脐带血,使用淋巴细胞分离液离心后取界面上的白色混浊状细胞层,加入含体积分数为10%胎牛血清、20 μ g/L碱性成纤维细胞生长因子、0.3 g/L L-谷胺酰胺、100 U/mL青霉素和100 g/L链霉素的L-DMEM培养液悬浮细胞,按2×109L-1密度接种于25cm2培养瓶中,待细胞达70%汇合时消化传代.取处于对数生长期的脐血基质细胞,将其培养基更换为含有地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C、体积分数为10%胎牛血清的L-DMEM培养基成骨诱导21～30 d.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态学特征,描绘生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,碱性磷酸酶染色和Von-Kossa染色检测成骨能力.结果:原代培养的人脐血基质细胞呈长梭形,需21～30 d长满瓶底,传代后细胞增殖缓慢并逐渐死亡,细胞平均倍增时间为42 h,处于G0/G1期的细胞达(86.54±2.31)%.在成骨诱导培养基里,脐血基质细胞增殖速度减慢,细胞形态无明显变化,成骨诱导14 d后碱性磷酸酶阳性率为(46.0±2.1)%,成骨诱导21 d形成钙化结节.结论:应用体积分数为10%胎牛血清、20 μ g/L碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM培养液可在体外成功分离培养出入脐血基质细胞,但细胞增殖能力有限,诱导后可向成骨细胞方向分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦书俭	辽宁医学院组织学与胚胎学教研室	98	432	10.0	14.0
3	刘霞	辽宁医学院组织学与胚胎学教研室	28	145	7.0	11.0
9	马云胜	辽宁医学院组织学与胚胎学教研室	28	94	5.0	8.0
10	罗美	辽宁医学院生物化学教研室	7	3	1.0	1.0