骨性材料复合绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞研究体系的建立与应用术

• 作者: 易正山 江千里 江汕 裴国献 赵培冉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨组织工程 绿色荧光蛋白 半固体脱钙 荧光定量聚合酶链反应 塑料包埋
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 1419-1422
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4767字
• 语种: 中文

摘要

背景:由于骨性生物材料和骨组织本身坚硬致密的物理特性,限制了对生长在其中的靶细胞的示踪研究.目的:针对骨性材料含钙、透光性差的特性,拟建立骨性材料复合绿色荧光蛋白基因标记的骨髓问充质干细胞的研究体系.设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-06/2009-01在南方医科大学南方医院骨与软骨再生医学重点实验室完成.材料:β磷酸三钙多孔骨性生物支架材料(1 cm×1 cmx0.8cm)购自上海贝奥路生物材料有限公司.3月龄新西兰大白兔用于获取并培养骨髓间充质干细胞.方法:①骨髓间充质干细胞以携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体标记后,接种于β-磷酸三钙骨性生物支架材料内部.②以荧光倒置显微镜观测材料中细胞的生长情况,并通过荧光定量聚合酶链反应等检测材料内部细胞的增殖情况.③以自创的半固体脱钙体系对复合细胞的材料脱钙后.制备连续冰冻切片观察;同时,采用不脱钙塑料包埋、扫描电镜等方法观察.主要观察指标:骨性材料中绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞的分布、形态及增殖情况.结果:①荧光显微镜下观察到绿色荧光细胞在材料内部生长、增殖.②普通聚合酶链反应可对材料内的绿色荧光细胞进行定性分析,荧光定量聚台酶链反应检测的Ct值和接种的绿色荧光细胞数量呈指数相关,故可以对材料中的绿色荧光细胞进行定量分析.③半固体脱钙可使骨性材料内部坚硬的钙质成分消失,而细胞所在的位置,形态和荧光不变;不脱钙塑料包埋可以原位保留细胞形态和荧光,但仅适用于小块组织;而扫描电镜观察范围有限,细胞无法保留荧光.结论:建立了可在骨性材料内部疗便、直观地追踪绿色荧光蛋白标记骨髓闻充质干细胞的体系,具有广泛的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴国献	南方医科大学南方医院创伤骨科	120	1119	18.0	24.0
2	赵培冉	南方医科大学南方医院创伤骨科	29	159	7.0	10.0
3	江千里	南方医科大学南方医院血液科	35	128	7.0	9.0
4	江汕	南方医科大学南方医院创伤骨科	34	184	8.0	12.0
5	易正山	南方医科大学南方医院血液科	21	48	4.0	5.0