大鼠半乳凝素9基因克隆及真核表达载体的构建

• 作者: 冉江华 刘静 张升宁 曹海鹰 李晓延 李来邦 李立 李铸 王谦 赵永恒
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 半乳凝素9 基因克隆 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（24）
• 所属期刊栏目: 组织构建相关实验造模
• 页码范围: 4717-4720
• 页数: 4页
• 分类号: R349.83
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.24.024

摘要

背景:研究提示,半乳凝素9在介导细胞分化、凋亡、黏附、细胞间聚集、炎症反应的调控方面发挥作用,但其作用机制尚不明确.目的:克隆大鼠半乳凝素9基因片段,构建pDC316-GFP-Galectin-9真核表达质粒,以进一步了解半乳凝素9各种功能和反应机制,设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-11/2009-01在北京本元正阳基因技术有限公司完成.材料:SPF级雄性Lewis大鼠1只.方法:采用反转录聚合酶链反应技术,从大鼠肝脏组织中扩增出大鼠半乳凝素9基因片段,通过基因重组技术将该基因片段重组到pDC316-GFP真核表达载体上,构建pDC316-GFP-Galectin-9重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定.主要观察指标:重组质粒的鉴定结果.结果:总RNA经RT-PCR扩增后,经琼脂糖凝胶电泳,在1 kb下方可见一条明显扩增的条带,与预计的半乳凝素9-cDNA长度相符.重组质粒经Not Ⅰ/HindⅢ双酶切和未作酶切的重组质粒pDC316-GFP-Galectin-9一起经琼脂糖凝胶电泳,前者出现了980 bp和5.8 kb 2条带(980 bp为Galectin-9-cDNA产物,5.8 kb为pDC316-GFP线状质粒),后者出现6.7 kb条带(重组质粒pDC316-GFP-Galectin-9),初步表明重组质粒构建成功.测序结果用NCBI上的BLAST进行比对分析,其核酸序列与GeneBank中的半乳凝素9的mRNA的编码序列(N M_012977)同源性完全相符,进一步证实所克隆的基因为大鼠半乳凝素9-cDNA.结论:成功克隆了半乳凝素9基因并构建成其真核表达质粒.