摘要:
背景:研究证明脱蛋白松质骨具有良好的孔隙结构、生物可降解性和力学特性,但是应用于临床还要考虑其安全性.目的:观察片种脱蛋白松质骨支架与经诱导骨髓间充质干细胞的相容性以及对其生物学行为的影响.设计、时间及地点:体外观察实验,于2008 02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验帘完成.材料:取成年猪新鲜股骨远端松质部分,初制为3 cm×0.5 cm×0.5 cm大小.抽取山羊髂骨骨髓,梯度密度离心法分离提.纯骨髓间充质干细胞,传至第2代时换含1 × 107mol/L地塞米松、1×10-2mol/L β-甘油磷酸钠、100 mg/L维生素C的培养液进行成骨诱导.方法:无菌条件下将支架材料置入6孔板内,每孔1块,重复3孔.调整细胞悬液浓度为2×10.一,向每块支架滴加细胞悬液1 mL,培养5 h后将骨块翻面后沿6孔板内壁缓慢加入诱导培养液10 mL.另3孔接种相同数量细胞单纯培养做对照分析.主要观察指标:倒置相差显微镜F观察细胞贴附及基质分泌情况,MTT法分析种子细胞与支架复合培养1,3,5,7 d后的存活和增殖能力,复合培养1,3,5,7 d后检测碱性磷酸酶活性,流式细胞仪分析复合培养7 d后细胞周期、DNA倍体水平及细胞凋亡率.结果:复合培养3 d时接种于支架J二的细胞在孔隙内表而贴壁生长,并分泌较多的细胞外基质,复合培养5,7 d,细胞基质分泌旺盛,几乎充满支架孔隙.在各个时间点复合材料组骨髓间充质干细胞增殖峰值高于单纯培养组,但差异无显著性意义(P>0.05).复合材料组倍增时间为3d,单纯培养组为3.15d.各时间点两组碱性磷酸酶活性差异无显著性意义(P>0.05).两组细胞周期大致相同,未见异倍体细胞.结论:异种脱蛋白松质骨与骨髓间充质干细胞有良好的细胞相容性并促进细胞生长分化.