Lipofectamine介导胞嘧啶脱氨酶基因转染鼠骨髓间充质干细胞

• 作者: 姬广春 宋飞 邢琪 马学虎 马郁芳
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 胞嘧啶脱氨酶 基因转染 脂质体
• 年，卷（期）: 2009,（49）
• 所属期刊栏目: 研究与报告
• 页码范围: 9775-9778
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 1363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.49.037

摘要

背景:自杀基因独有的旁观者效应,可显著提供肿瘤细胞杀伤效果,同时还与放射治疗、免疫基因治疗联合应用,并克服了基因转导效率低的缺陷.胞嘧啶脱氨酶即可产生强大的旁观者效应.目的:观察脂质体介导真核表达载体胞嘧啶脱氨酶基因转染鼠骨髓间充质干细胞的效果及其基因表达.设计、时间及地点:细胞学基因水平体外实验,于2007-05/12在大连理工大学干细胞与组织工程研发中心完成.材料:SPF级C57BL纯系小鼠6只,体质量18-20 g,用于骨髓间充质干细胞的分离培养.连接产物转化感受态大肠杆菌DH5a由大连理工大学干细胞与组织工程研发中心提供.Lipofectamine~(TM)2000脂质体为Invitrogen产品.方法:取连接产物转化感受态大肠杆菌DH5a,提取质粒DNA,对质粒plRES2-cGFP1-CD进行Xhol和BamHI双酶切,用于转染.取小鼠双侧下肢股骨和胫骨,贴壁法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代制成单细胞悬液,加入荧光标记的CD44,CD45,CD90,CD105抗体后,采用Lipofectamine~(TM)2000介导法转染第3代鼠骨髓间充质干细胞.主要观察指标:重组质粒的鉴定,流式细胞仪检测鼠骨髓间充质干细胞表面标记表达,荧光倒置显微镜观察细胞转染36,48 h后胞嘧啶脱氨酶基因的表达.结果:质粒plRES2-AcGFP1-CD酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后,于1.0～1.5 kb处有1条带出现,符合胞嘧啶脱氨酶基因长度.流式细胞仪检测显示细胞表面标记CD45呈阴性,CD44,CD90,CD105呈阳性.plRES2-AcGFP1-CD基因转染36 h后,荧光倒置相差显微镜下可见小鼠骨髓间充质干细胞有绿色荧光蛋白表达,48 h后细胞仍有荧光表达,且强度明显增强.结论:脂质体介导的胞嘧啶脱氨酶基因在鼠骨髓间充质干细胞中成功表达,于转染48 h后达峰值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋飞	大连理工大学环境与生命学院	14	19	3.0	3.0
3	马郁芳	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	21	63	4.0	7.0
4	邢琪	大连医科大学附属第一临床学院神经外科	7	16	3.0	3.0
5	马学虎	大连理工大学环境与生命学院	146	1240	20.0	29.0
8	姬广春	大连医科大学附属第二临床学院神经外科	4	4	1.0	2.0