成年大鼠心肌细胞分离方法的改良

• 作者: 廖华 涂志业 糜涛 郭小梅 陈莉莉
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌细胞 细胞分离 细胞培养 大鼠
• 年，卷（期）: 2009,（33）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 6536-6539
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 4934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.33.028

摘要

背景:目前多采用酶解法分离成年大鼠心肌细胞,但在灌流装置、灌流液体和灌流方法等方面的差异较大,且多以单个细胞的急性分离为目的,仅适于进行电生理研究.目的:建立稳定的改良成年SD大鼠心肌细胞分离方法,使之适于进行原代培养和研究.设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/09在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心完成.材料:8～10周龄雄性SD大鼠30只,由同济医学院实验动物中心提供,Ⅱ型胶原酶、蛋白酶和不含脂肪酸的牛血清白蛋白分别为美国Worthington公司、美国Sigma公司和德国Merck公司产品.方法:SD大鼠麻醉后,快速取出心脏,采用改良的Langendorff灌流装置行主动脉逆行灌注,无钙Krebs-Henseleit缓冲液(KH液)非循环灌流4 min,0.6 g/L Worthington 2型胶原酶联合0.03 g/L蛋白酶消化约15 min,剪下心室组织于消化液和10 g/L牛血清白蛋白的混合液中,剪碎后于37℃振摇孵育10min,200 μm尼龙网过滤,500 g离心1 min,梯度复钙,自然沉降.主要观察指标:心肌细胞的形态、活力和产量.结果:复钙后的杆状存活心肌细胞得率为(73±5.6)%(n=30),其中90%以上的杆状心肌无明显搏动,横纹清晰.每只大鼠心脏的平均存活心肌细胞产量为(4.2±0.4)×106.结论:经过改良的Langendorff逆行主动脉灌流酶解法分离成年大鼠心肌细胞,可稳定获得高比例的存活心肌细胞并用于原代培养和细胞,分子生物学研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	糜涛	华中科技大学同济医学院附属同济医院综合内科	15	87	6.0	8.0
2	陈莉莉	华中科技大学同济医学院附属同济医院综合内科	51	312	11.0	14.0
3	郭小梅	华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科	74	543	12.0	18.0
4	涂志业	华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科	3	28	2.0	3.0
5	廖华	华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科	8	117	6.0	8.0