密度梯度离心与贴壁筛选法体外分离培养胎儿骨髓间充质干细胞

• 作者: 刘斌 戎利民 曾春 董健文 蔡道章
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 胎儿 骨髓间充质干细胞 培养
• 年，卷（期）: 2009,（40）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 7913-7918
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6708字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.40.022

摘要

背景:胎儿骨髓间充质干细胞与成人相比,具有更好的自我更新和分化能力,以及更低的免疫原性.目的:选择更适应胎儿骨髓间充质干细胞体外分离培养的方法.设计、时间及地点:单一样本细胞学观察,于2005-06/12在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:16-24周胎龄的流产胎儿由中山大学附属第三医院妇产科提供,产妇及家属均签署知情同意书.方法:无菌条件下截取流产胎儿双侧四肢骨,PBS冲洗髓腔,离心去脂肪及上清液,L-DMEM重悬细胞,沿管壁缓慢滴加至底部有等量1.073 g/mL Percoll分离液的离心管中,离心后吸取中间界面白膜层,加入含体积分数为10%的胎牛血清、青霉素钠、链霉素的L-DMEM完全培养基,接种后置于37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度孵箱内培养.48 h后换液,去除未贴壁细胞,以后每2d换液一次.待细胞达到80%～90%融合时,胰酶-EDTA消化传代.主要观察指标:倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞技术检测其表面标记物;碱性磷酸酶染色检测成骨分化能力;Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测成软骨分化能力.结果:原代及传代培养的胎儿骨髓间充质干细胞呈梭形外观,具有较强的增殖能力.胞体较小,细胞核/浆比例大,胞核呈圆形或椭圆形,胞浆少,染色质较疏松,表现出早期细胞的特点,传至第20代细胞超微结构仍无明显改变.细胞表面抗原CD29,CD44,CD105呈阳性表达,CD34,CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原均呈阳性.结论:利用密度梯度离心+贴壁筛选法可成功分离培养胎儿骨髓间充质干细胞,所获细胞能够向成骨细胞及软骨细胞分化,该方法为体外培养扩增胎儿骨髓间充质干细胞的简单、稳定、高效的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘斌	中山大学附属第三医院脊柱外科	122	778	16.0	21.0
2	戎利民	中山大学附属第三医院脊柱外科	93	535	11.0	19.0
3	董健文	中山大学附属第三医院脊柱外科	41	347	10.0	17.0