胍基化修饰结合稀土金属标记应用于蛋白质相对定量研究

• 作者: 卫军营 张养军 林虹君 蔡耘 贾伟 钱小红
• 来源期刊: 质谱学报
• 学科: 化学
• 关键词: 稀土金属标签 胍基化修饰 蛋白质定量
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 283-290
• 分类号: O657.63
• 字数: 4017字
• 语种: 中文

摘要

稀土金属元素标记技术利用双功能试剂二乙三胺五乙酸双酸酐(DTPA双酸酐)将稀土金属元素和目标肽段连接起来作为质量标签,结合基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析实现蛋白质的相对定量研究.为进一步提高标记效率,本研究对反应体系温度、pH值、反应时间和金属标签过量倍数等进行优化,并结合胍基化修饰技术封闭蛋白质酶切肽段中的侧链ε-氨基,使标记反应只发生在末端氨基,提高标记选择性.标准蛋白质实验结果表明,所有酶切肽段胍基化反应效率均大于95%,且胍基化修饰反应对金属标记效率没有影响.对于选定的7个标准蛋白质而言,每个蛋白质都至少有3个肽段可以得到良好的标记结果.对于离子抑制效应带来的干扰,可通过标准曲线进行校正,结果表明,当两种金属离子浓度比小于6时,该效应对蛋白质相对定量没有影响.胍基化修饰结合稀土金属标记方法不仅能在肽段水平实现相对定量,而且能在蛋白质水平实现相对定量.