猪细胞周期蛋白A基因的克隆及其功能研究

• 作者: 仝刚 刘伟 唐青海 张彦明 范丽
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细胞周期蛋白A基因 克隆 猪脐静脉血管内皮细胞 真核表达 细胞周期 MTS
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 469-477
• 分类号: S852.23|Q78
• 字数: 5943字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在克隆猪细胞周期蛋白A基因(Cyclin A),并在猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)中表达,以验证其功能.以人的Cyclin A基因为信息探针,经电子克隆得到猪Cyclin A基因,通过RT-PCR和DNA测序验证电子克隆结果并对其作生物信息学分析,用RT-PCR、Western blot研究它在SUVEC中的表达情况.应用激光共聚焦显微镜分析它在细胞中的亚细胞定位,并通过流式细胞仪分析细胞周期以及用MTS法测定细胞的增殖能力.结果如下:核酸测序证明RT-PCR产物同电子克隆结果相符.该cDNA包含1 299 bp的完整开放阅读框(ORF),共编码432个氨基酸,经NCBI BLAST分析,该基因定位于猪的8号染色体上.Western blot结果显示Cyclin A基因编码蛋白的相对分子质量大小约为40 ku,亚细胞定位研究表明该蛋白定位于细胞核中.经流式细胞仪分析表明稳定表达该基因的细胞,其G_1期的细胞数量比对照组细胞增加了15%～20%,而S期的细胞数量比对照组细胞减少了约18%;MTS法检测显示细胞株SUVEC-CycAGFP的增殖活性明显高于对照组细胞.作者成功克隆到新基因猪源细胞周期蛋白A,并验证了其生物学功能,为今后开展病毒感染对猪细胞周期蛋白A影响的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘伟	西北农林科技大学动医学院	47	207	9.0	12.0
2	张彦明	西北农林科技大学动医学院	256	1530	16.0	24.0
3	唐青海	西北农林科技大学动医学院	16	41	4.0	5.0
4	范丽	西北农林科技大学动医学院	1	0	0.0	0.0
5	仝刚	西北农林科技大学动医学院	2	3	1.0	1.0