鸭脂联素基因全长cDNA的克隆和原核表达的研究

• 作者: 孟和 张营 董飚 薛茂云 郁建锋 顾志良 龚道清
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 脂联素基因 RACE 基因组织表达 原核表达
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1232-1239
• 分类号: S834|S813.3
• 字数: 6284字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在通过克隆鸭脂联素(Adiponectin)基因序列并进行序列分析,揭示该基因的序列特征、组织特异性表达规律,并对其进行原核表达.采用RT-PCR、5'-RACE和3'-RACE的方法从鸭脂肪组织总RNA中扩增脂联素基因cDNA片段;半定量RT-PCR检测组织表达特异性;构建原核表达载体,建立原核表达体系.从鸭脂肪组织中得到3个脂联素基因cDNA片段,克隆测序后,拼接获得了鸭脂联素基因1 374 bp全长cDNA序列,其包含一个长度为738 bp完整的开放阅读框,编码245个氨基酸;编码区与鹅、鸡脂联素基因序列的同源性分别为94.9%和86.0%,与人、小鼠、狗等物种脂联素基因的同源性在64.2%～67.0%之间;氨基酸序列比较可知,鸭与鹅、鸡的脂联素氨基酸的同源性分别达95.5%和84.0%,与人、小鼠、狗等哺乳动物的同源性在65%左右.半定量RT-PCR研究结果表明脂联素基因在所测组织中均表达,且高度表达于脂肪组织、肌胃、小肠、心和骨骼肌,中度表达于肺、腺胃、卵巢和脾组织中,而在肝、肾和间脑中低度表达.构建得到在其C端含有8个组氨酸的鸭脂联素融合蛋白表达载体pET41a-duck-adp,重组表达质粒转入BL21(DE3)大肠杆菌中表达,经IPTG诱导后并SDS-PAGE检测获得了30 ku的鸭脂联素原核表达蛋白.脂联索基因在动物进化中具有一定的保守性,该基因在不同组织中表达水平不同,通过原核表达可获得鸭脂联素的重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚道清	扬州大学动物科学与技术学院	148	1242	17.0	28.0
2	孟和	上海交通大学农业与生物学院	67	735	16.0	24.0
3	薛茂云		46	174	7.0	10.0
4	顾志良	常熟理工学院生物系	65	234	8.0	12.0
5	郁建锋	常熟理工学院生物系	53	317	10.0	15.0
6	董飚		6	35	4.0	5.0
7	张营	常熟理工学院生物系	8	51	3.0	7.0