RNAi沉默整合素连接激酶基因表达对膀胱癌细胞BIU-87增殖的影响

• 作者: 王德林 陈亮 黄飚
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 膀胱癌 整合素连接激酶(ILK) 微小RNA RNA干扰 稳定转染
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 528-533
• 分类号: R737.14
• 字数: 4379字
• 语种: 中文

摘要

为了研究整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因沉默对膀胱癌BIU-87细胞系增殖产生的影响,应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,合成了4条针对ILK的miRNA干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-ILK-miR(miR-1、miR-2、miR-3、miR-4)作为实验组,另设1条为阴性对照组,分别转染膀胱癌BIU-87细胞系.经杀稻瘟菌素持续压力筛选和有限稀释法培养获得稳定转染细胞株.采用RT-PCR和Western-blot检测各组对ILK基因的抑制作用.实验组miRNA对BIU-87细胞ILK mRNA和蛋白的表达均有明显的抑制作用,以miR-3组抑制效应最强.通过流式细胞术检测发现,miR-3组细胞周期G0/G1期细胞所占比例较未转染组明显增加,而S期则明显减少(P＜0.05).四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测发现,转染组细胞在体外的增殖能力较对照组明显下降(P＜0.05).证明RNA干扰技术能有效抑制靶基因ILK的表达,进而抑制了膀胱癌细胞系BIU-87的增殖.