热硫化氢高温厌氧杆菌的Ttx31基因克隆、表达与功能分析

• 作者: 杜照奎 谢和芳 黄伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 热硫化氢高温厌氧杆菌 碳水化合物结合结构域 菌落PCR 糊精结合结构域
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 356-361
• 分类号: Q93
• 字数: 4845字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.02.025

摘要

生物信息学分析发现,热硫化氢高温厌氧杆菌(Thermowmerobacter thermohydrosulfuricus)的α-淀粉酶/普鲁兰糖酶(α-amylase/pullulanase)基因中的一段未知功能序列Ttx31可能编码碳水化合物结合结构域(carbohydrate binding module,CBM),但其结合特性未知.本实验以T. thermohydrosulfuricus为材料,通过菌落PCR扩增其Tts31序列,将获得的Ttx31克隆到表达载体pET22b(+)中得到重组质粒pEX31,序列分析表明,所得重组表达载体pEX31中的Ttx31序列正确.将重组载体pEX31转入大肠杆菌宿主表达菌Tuner中,IPTG诱导表达后纯化,采用SDS-PAGE电泳和非变性亲和凝胶电泳法,研究重组表达的目的蛋白TtX31与糖的相互作用.结果发现,TtX31能结合糊精,但不能结合可溶性淀粉、普鲁兰糖、支链淀粉等.实验结果可以认为TtX31是一种功能性的新碳水化合物结合结构域,可以结合糊精.