海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建

• 作者: 刘中来 刘艳丽 祁超 邓海 邓灵福 郭建军 马艳玲
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 海洋放线菌Streptomyces sp. 基因组文库 噬菌体
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 1-3
• 分类号: Q785
• 字数: 4157字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2010.05.145

摘要

目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库.方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coli EPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定.结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克降子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%.阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存.结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况.