鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备

• 作者: 杨孙孝 梁洪 钱云霞 钱伦 钱凯先
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲈 过氧化物酶体增殖剂激活受体γ 组织表达 抗体
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1156-1164
• 分类号: Q959.483|Q786|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.06954

摘要

根据GenBank上其他物种的PPARγ基因序列设计兼并引物,从鲈肝脏cDNA中扩增得到鲈PPARγ基因cDNA序列1 588 bp,分析表明该基因的开放阅读框为1 569 bp,编码522个氨基酸,理论等电点6.06,分子量59.02 ku.将鲈PPARγ氨基酸序列比对后发现与欧洲鲈同源性最高,为93.1%;与金头鲷的同源性为92.3%,与人同源性也达到为61.8%.用RT-PCR分析该基因组织表达模式,结果表明,鲈PPARγ主要分布于肝脏、鳃和脂肪组织.将鲈PPARγ开放阅读框1 569 bp序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)构成pET-28a-PPARγ1569重组体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度1 mmol/L的IPTG对其进行诱导表达4 h,SDS-PAGE电泳分析表明,pET-28a-PPARγ1569菌株在66 ku处有1条特异的蛋白带,Western-blotting检测表明该蛋白为鲈PPARγ融合蛋白.用镍离子亲和柱纯化的鲈PPARγ融合蛋白免疫小鼠得到其多克隆抗体.用间接ELISA法检测鲈PPARγ抗体的抗体效价约为1:16 000.实验结果为进一步研究鲈PPARγ蛋白的生物学特性及功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱凯先	浙江大学生命科学学院	44	680	13.0	25.0
2	梁洪	宁波大学生命科学与生物技术学院	3	48	3.0	3.0
3	钱云霞	浙江大学生命科学学院	52	856	13.0	28.0
5	钱伦	宁波大学生命科学与生物技术学院	5	9	2.0	3.0
6	杨孙孝	宁波大学生命科学与生物技术学院	3	4	1.0	2.0