siRNA特异性沉默hTERT基因对人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响

• 作者: 何裕隆 吴晖 张信华 杨东杰 蔡世荣 詹文华 陈创奇 马晋平
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 结直肠肿瘤 端粒酶逆转录酶
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 2332-2336
• 分类号: Q71|R394.3
• 字数: 4352字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2010.12.009

摘要

目的:探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制人结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响和机制.方法:构建针对hTERT基因的siRNA (pU6-hTERT-siRNA),LipofectamineTM2000转染LoVo细胞,以同源性的pU6作阴性对照,以未转染的细胞作空白对照.MTT法检测细胞生长率.建立裸鼠结肠癌皮下移植瘤模型,瘤内注射法将pU6-hTERT-siRNAs、pU6转导,观察各组移植瘤生长情况.RT-PCR和荧光定量PCR检测细胞株和移植瘤细胞hTERT mRNA水平的变化.Western blotting检测hTERT蛋白水平的变化.结果:LoVo细胞转染pU6-hTERT-siRNA 72 h后,细胞增殖抑制率达42.1%,显著高于阴性对照组(3.2%),P<0.01.裸鼠皮下移植瘤转染pU6-hTERT-siRNA 14 d后,种植瘤体积为(85.9±18.7)mm3,显著小于阴性对照组[(157.4±55.6)mm3]和空白对照组[(155.2±54.2)mm3],P<0.01.荧光定量PCR和Western blotting结果显示转染pU6-hTERT-siRNA后,细胞株和移植瘤内的hTERT mRNA以及细胞株蛋白水平表达显著减少(P<0.01),阴性对照和空白对照间无显著差异.结论:pU6-hTERT-siRNA在体内外能有效抑制结肠癌LoVo细胞中hTERT基因表达,对裸鼠皮下结肠癌细胞移植瘤有明显的抑制生长作用.