慢病毒介导靶向PRL-3基因的siRNA抑制肝癌细胞的侵袭性

• 作者: 张琪 李华 陈伟 陈规划 黄德好
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒 PRL-3 肝细胞癌
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 309-314
• 分类号: R735.7
• 字数: 4685字
• 语种: 中文

摘要

[目的]探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响.[方法]设计、合成4对针对PRL-3基因siRNA的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T细胞,据其对PRL-3的抑制率,筛选最有效的PRL-3基因RNAi靶序列,设计并合成其siRNA的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA.并行PCR和测序鉴定.将LV-PRL3-SiRNA,pHelper 1.0和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平经孔稀释法测定病毒滴度.重组慢病毒感染肝癌SMCC7721细胞,行real time-PCR和western-blot验证PRL-3基因的沉默效果.用Transwell侵袭试验检测SMCC7721细胞体外侵袭力的改变.[结果]成功构建PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6×108Tu/mL.和对照组相比,RNA干扰组SMMC7721细胞PRL-3基因的mRNA水平和蛋白水平的抑制率分别为75%和63%;其穿过人工基底膜的平均数(14.2±0.8)明显少于空白对照组(33.0±1.6)及非特异性siRNA感染组(31.2±0.8),侵袭抑制率为58%(P＜0.01).[结论]降低PRL-3的表达可抑制肝癌细胞的侵袭能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈规划	中山大学附属第三医院肝移植科	219	1270	16.0	25.0
2	张琪	中山大学附属第三医院肝移植科	49	172	7.0	9.0
3	陈伟	中山大学附属第三医院肝移植科	172	694	11.0	16.0
4	李华	中山大学附属第三医院肝移植科	61	347	10.0	15.0
5	黄德好	中山大学附属第三医院肝移植科	1	4	1.0	1.0