流式细胞术同时检测GFP和PI细胞的预处理方法

• 作者: 李冰 邹东霆
• 来源期刊: 广州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: GFP 转染 细胞周期 淬灭 乙醇 多聚甲醛
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 63-65
• 分类号: R318
• 字数: 2125字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1836.2010.05.018

摘要

目的:以绿色荧光蛋白(GFP)作为报道基因,探讨转染GFP的培养细胞检测细胞周期的流式细胞技术.方法:用贴壁细胞MCF-7细胞以脂质体转染PEGFP-C2,转染后24 h收集细胞,分别用70%乙醇固定、1%多聚甲醛固定和1%多聚甲醛固定后用透膜剂透膜PI染色,以非转染细胞作为阴性对照,转染GFP非固定细胞作为阳性对照,用流式细胞仪检测.结果:用70%乙醇固定细胞导致GFP完全淬灭;用1%多聚甲醛固定保持99%的GFP阳性率,荧光强度稍有下降;而经过皂素破膜和PI染色后,GFP的阳性率也能保持有原来的80%左右;1%多聚甲醛固定24h内对GFP的阳性率没有大的影响.结论:对于含有GFP基因的细胞在进行流式细胞周期的检测时,应避免使用细胞周期常规的乙醇固定方法;1%多聚甲醛固定加皂素破膜能有效保证GFP的荧光活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李冰	广州医学院实验医学研究中心	139	847	15.0	20.0
2	邹东霆	广州医学院实验医学研究中心	14	62	5.0	7.0