小发夹RNA在稀有(鱼句)鲫胚胎中的表达

• 作者: 廖兰杰 朱作言 杨琳 汪亚平
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 小干扰RNA 小发夹RNA Stem-loop RT-PCR 草鱼出血病病毒
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 1031-1036
• 分类号: Q786
• 字数: 3559字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1035.2010.01031

摘要

由小的干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来快速发展的一种转录后基因沉默方法,已被广泛的应用于基因功能的研究,基因网络调控的探讨以及疾病的治疗等方面.多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶Ⅲ启动子中的一种,操纵一段短发夹结构RNA(Small hairpin RNA,shRNA)在细胞或体内表达.这一类启动子主要包括人源和鼠源的U6启动子和人H1启动子等.为了探明鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子是否能有效驱动shRNA在鱼体内表达,从而更好地利用RNAi进行鱼类基因功能和抗病毒研究,研究利用斑马鱼的H1和u6启动子以及草鱼的H1启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,分别构建了三个shRNA表达载体:pZH1siGCRV-CMVeGFP、pZU6siGCRV-CMVeGFP和pCH1siGCRV-CMVeGFP.通过显微注射将三种表达载体分别导入稀有(鱼句)鲫(Gobiocypris rarus)受精卵中.由于siRNA片段很短,其表达检测非常困难,研究采用stem-loop RT-PCR方法,对稀有(鱼句)鲫胚胎发育不同时期的shRNA表达进行了检测.研究结果表明,采用的三种鱼类自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子均能有效驱动GCRVsiRNA的表达;在取样的各个胚胎发育时期均能检测到GCRV siRNA的表达;stem-loop RT-PCR方法可以便捷检测siRNA的表达.研究构建的鱼类胚胎siRNA有效持续表达载体,建立的简易快捷siRNA检测方法,为进一步的抗GCRV转基因鱼研制以及siRNA的病毒复制干扰机制研究奠定了重要基础并提供有力的技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪亚平	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	59	896	16.0	28.0
2	朱作言	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	64	813	16.0	25.0
3	廖兰杰	中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室	3	4	1.0	2.0