与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用

• 作者: 李俊 梁山辉 鹿欣
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢肿瘤 微RNAs 细胞支架蛋白质类 肿瘤转移
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 787-792
• 分类号: R73
• 字数: 5117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2010.10.015

摘要

目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李俊	复旦大学附属妇产科医院妇科	27	174	8.0	12.0
2	鹿欣	复旦大学附属妇产科医院妇科	49	308	11.0	14.0
3	梁山辉	复旦大学附属妇产科医院妇科	3	33	2.0	3.0