利用DNA shuffling构建部分解除对氟苯丙氨酸反馈抑制的aroG

• 作者: 李晓萍 江培翃 边英男 郝瑞昕 黄伟达
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: DAHP 合成酶 aroG aroF aroH DNA shuffling Phe 反馈抑制
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 568-574
• 页数: 7页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文

摘要

3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DAHPs)是芳香族氨基酸生物合成途径中关键的限速酶,在大肠杆菌中有3种同工酶,分别由aroG(Phe)、aroH(Trp)和aroF(Tyr)基因编码,这3种酶分别受苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸反馈抑制.为得到解除苯丙氨酸反馈抑制的突变AroG,以Escherichia coli野生型aroG、aroH和aroF基因为亲本,通过DNA shuffling技术对aroG基因进行改组,将获得的改组aroG与载体pET30a连接得到改组文库,转化到E. coli BL21(DE3)中,在含有Phe类似物对氟苯丙氨酸(p-FP)的培养基上筛选转化子,获得2个能耐受10 mg/mL p-FP的克隆.这2个克隆的测序结果显示,其中一个发生了3个点突变:C129T,A531G,A1032G;另一个发生了3个点突变T77A,G883A,Al032G和4个碱基的插入突变即922位插入A,943位插入CG,971位插入A.2个改组AroG的最适pH和最适温度与野生型AroG相比无明显变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄伟达		57	398	13.0	15.0
2	江培翃		9	52	4.0	7.0
3	边英男		5	8	1.0	2.0
4	李晓萍		3	4	1.0	2.0
5	郝瑞昕		2	0	0.0	0.0