一种新型结缔组织生长因子人源单链抗体的可溶性表达以及分离纯化

• 作者: 刘乃丰 刘昭 吴国球 奚涛 沈子龙 苟丽霞 范小波
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源单链抗体 结缔组织生长因子 弹性蛋白 分离纯化
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 361-366
• 分类号: Q512.6|Q511|Q591.2
• 字数: 4658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2010.04.002

摘要

目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价.方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X 3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的可溶性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性.结果:抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21(DE3)中不能表达,在pET32a/BL21(DE3)和pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功表达,但是在pET-EI:X/BLR(DE3)中scFv抗体无法从内含肽(intein)上裂解.scFv在pET32a/BL21(DE3)中表达量占总蛋白的30%左右,经过两步层析纯化后纯度达到85%以上.体外免疫试验显示,目的蛋白具有良好的免疫学活性.结论:人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/BL21(DE3)中成功得到表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	奚涛	中国药科大学生命科学与技术学院	138	927	15.0	25.0
2	沈子龙	中国药科大学生命科学与技术学院	86	688	11.0	23.0
3	刘乃丰	东南大学附属中大医院临床检验中心	171	1070	15.0	23.0
4	吴国球	东南大学附属中大医院临床检验中心	46	241	8.0	13.0
5	范小波	中国药科大学生命科学与技术学院	2	7	1.0	2.0
6	苟丽霞	东南大学附属中大医院临床检验中心	3	16	2.0	3.0
7	刘昭	东南大学附属中大医院临床检验中心	1	0	0.0	0.0