溶藻弧菌外膜蛋白OmpK基因表达和间接ELISA检测方法的初步建立

• 作者: 丁文超 史雨红 李明云 陈炯
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 溶藻弧菌 OmpK基因 原核表达 间接酶联免疫吸附法
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1559-1565
• 分类号: Q786|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.07005

摘要

溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义.以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致.将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21 pLys E,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性.利用该抗溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的抗血清建立了间接ELISA检测方法,检测灵敏度为104CFU/mL,能特异性检测出溶藻弧菌,与其他菌株无交叉反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	100	594	13.0	18.0
2	史雨红	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	47	397	10.0	18.0
3	李明云	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	156	1723	22.0	34.0
4	丁文超	宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室	6	98	5.0	6.0