钝齿棒杆菌乙酰谷氨酸激酶编码基因argB的克隆表达、纯化及酶学性质研究

• 作者: 刘飞 张晓梅 徐美娟 窦文芳 许正宏 许泓瑜 饶志明
• 来源期刊: 工业微生物
• 学科: 生物学
• 关键词: 钝齿棒杆菌 乙酰谷氨酸激酶 表达 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 23-28
• 分类号: Q93
• 字数: 3794字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-6678.2010.04.005

摘要

本研究的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA)是筛选得到的高产精氨酸突变菌株,其中argB基因编码的乙酰谷氨酸激酶(NAGK)是精氨酸合成过程中的关键酶.为了进一步研究该酶的相关特性,以钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum SYPA)基因组为模板,扩增得到其argB基因,成功构建了pET-28a-argB重组质粒,并在E.coli BL21(DE3)中诱导后高效表达.利用载体pET-28a上的His6·Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的NAGK,纯化后酶的比活力达到7.28 U/mg,纯化倍数达66.18.并对该酶的酶学性质进行了初步研究,该酶的最适反应温度为30 ℃;最适pH值为9.0;酶学动力学参数以N-乙酰谷氨酸为底物的Km为3.35 mmol/L;金属离子Cu2+、Mn2+、螯合剂对乙酰谷氨酸激酶均有明显的抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	窦文芳	江南大学医药学院	55	278	10.0	13.0
2	张晓梅	江南大学医药学院	53	428	11.0	18.0
3	许泓瑜	江南大学医药学院	77	764	14.0	23.0
4	饶志明	工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院工业微生物研究中心	4	35	3.0	4.0
5	许正宏		2	7	2.0	2.0
6	刘飞	工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院工业微生物研究中心	1	3	1.0	1.0
7	徐美娟	工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院工业微生物研究中心	2	3	1.0	1.0