急性肾损伤微环境对培养骨髓间充质干细胞分化及分裂增殖的影响

• 作者: 刘楠梅 张金元 王巍巍 田军 程劲 胡大勇
• 来源期刊: 肾脏病与透析肾移植杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾脏损伤 骨髓间充质干细胞 分化 分裂增殖
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 435-439,444
• 分类号: R6
• 字数: 3959字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-298X.2010.05.007

摘要

目的:观察体外模拟急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的微环境下,小鼠骨髓间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,mMSCs)分化及分裂增殖情况.方法:采用夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30min再开放30 min的方法制作缺血再灌注(I/R)性AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作L/R肾脏匀浆上清.抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出mMSCs,以流式细胞仪鉴定.取扩增3代的mMSCs分组培养:(1)对照组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;(2)干预组:含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基+I/R肾脏匀浆上清.诱导1d、3d、5d、7d后倒置显微镜下观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构;流式细胞仪检测角蛋白18(cytokeratin 18,CK18);CCK-8法检测培养mMSCs的增生;TUNEL法检测mMSCs凋亡.结果:分离获得的P3-mMSCs高表达CD29和CD44,低表达CD34和CD45.与对照组长梭形细胞相比,干预组第3天可见部分细胞为椭圆形、短梭形,至第7天大部分细胞呈圆形、椭圆形、短胖梭形;透射电镜也观察到胞质内开始出现较多的粗面内质网、溶酶体、线粒体.流式细胞仪检测发现,对照组mMSCs内仅有极微量CK18表达,而干预组CK18阳性表达率显著增加.经I/R肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSCs的增殖效应均显著减弱,而TUNEL检测显示胞核染色阳性的细胞百分比有显著升高(P<0.01).结论:体外模拟的AKI微环境可诱导mMSCs部分分化为肾小管上皮样细胞,但同时也会导致培养的mMSCs凋亡,增殖能力减弱,进而减少了可肾向分化的mMSCs数量,推测这可能是MSCs体内移植促肾修复能力有限的原因之一.