日本沼虾VASA蛋白的原核表达、抗体制备及其免疫鉴定

• 作者: 崔峥 朱小玲 邱高峰
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本沼虾 VASA蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 页码范围: 1495-1501
• 分类号: Q785|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2010.06894

摘要

Vasa基因具有在性腺中特异表达的特点,在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用.从日本沼虾精巢cDNA中克隆了vasa基因的阅读框,连接到pET-32a载体,构建重组表达质粒pET32a-vasa,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导融合表达,表达产物经SDS-PAGE分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约85 ku,表达量约占包涵体总蛋白的48.7%,Western-blotting检测表明,融合蛋白可特异地被anti-HIS标签抗体识别.用Ni2+-NTA纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备获得多克隆抗体,ELISA显示该抗体效价达1:160 000,Western免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白,而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性VASA蛋白,免疫组化进一步显示,VASA蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中,成熟精子中无信号,暗示VASA在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱小玲	上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室	5	65	4.0	5.0
2	崔峥	上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室	3	20	2.0	3.0