纤细齿梗孢丝氨酸蛋白酶cDNA克隆及其序列分析和表达

• 作者: 刘连盟 张亚波 李多川 李安娜
• 来源期刊: 中国生物防治
• 学科: 生物学
• 关键词: 菌寄生真菌 纤细齿梗孢 丝氨酸蛋白酶 cDNA克隆 毕赤酵母 表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 327-334
• 分类号: Q786|Q814.1|Q949.32
• 字数: 4932字
• 语种: 中文

摘要

纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum 是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌.丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用.根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段.其可读框为1554bp(GenBank登录号为EU368754),编码517个氨基酸的蛋白质.比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构.将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml.重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD.其反应的最适温度为60℃,最适pH为8.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李多川	山东农业大学植物病理学系	73	827	17.0	23.0
2	李安娜	山东农业大学植物病理学系	9	73	4.0	8.0
3	张亚波	山东农业大学植物病理学系	3	19	2.0	3.0
4	刘连盟	山东农业大学植物病理学系	1	2	1.0	1.0