MMP-2-PEX原核表达纯化及其对黑色素瘤细胞与内皮细胞黏附的影响

• 作者: 宋直钰 张磊 汤永永 王字玲 赵敬湘 魏广智
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 基质金属蛋白酶2 黑色素瘤 血红素结合蛋白样结构域 细胞黏附 内皮细胞
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 528-531,539
• 分类号: R734.2
• 字数: 5268字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.06.008

摘要

目的 探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域(MMP-2-PEX)对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响.方法 利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;盐酸胍裂解包涵体,经镍琼脂糖凝胶柱纯化,透析复性后获得MMP-2-PEX蛋白,随后对其进行Western印迹和质谱鉴定.采用明胶酶谱法检测MMP-2-PEX的活性;采用平行板流动小室系统检测在流动状态下MMP-2-PEX对A375细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC黏附的影响,通过小鼠实验性肺转移模型检测MMP-2-PEX对A375细胞在小鼠肺内癌栓形成的影响.结果 Western印迹和质谱鉴定原核表达的MMP-2-PEX蛋白正确,明胶酶谱检测MMP-2-PEX能够明显抑制MMP-2的活性.表达的MMP-2-PEX蛋白能够在流动状态下抑制A375细胞与HUVEC细胞的黏附,其黏附抑制率与MMP-2-PEX蛋白浓度增加成正相关,MMP-2-PEX浓度为12.5,25和50 μg/ml时抑制率分别为32.5%,41.4%和53.9%.用MMP-2-PEX处理后,A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成与对照组相比降低了26.4%. 结论 原核表达的人MMP-2-PEX在体外流动状态下可抑制A375细胞与内皮细胞的黏附,并抑制A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王字玲	军事医学科学院野战输血研究所	47	218	8.0	11.0
2	赵敬湘	军事医学科学院野战输血研究所	23	79	5.0	7.0
3	魏广智	军事医学科学院野战输血研究所	7	18	3.0	4.0
4	汤永永	军事医学科学院野战输血研究所	2	3	1.0	1.0
5	张磊	军事医学科学院野战输血研究所	2	0	0.0	0.0
6	宋直钰	军事医学科学院野战输血研究所	1	0	0.0	0.0