应用real-time PCR定量检测小麦条锈菌潜伏侵染量方法的建立

• 作者: 孙振宇 潘娟娟 赵磊 闫佳会 马占鸿 骆勇 黄冲
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦条锈病 潜伏侵染 real-time PCR 分子流行学
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 504-510
• 分类号: S4
• 字数: 3986字
• 语种: 中文

摘要

小麦条锈病是我国小麦主要病害之一.快速、及时地诊断与定量监测处于潜育状态下的病叶,对准确估计越冬、越夏后的病情,制定正确的防治方案具有重要的意义.根据小麦条锈菌Puccinia striiformis的β-tubilin基因序列设计对该病原菌的种具有特异性的引物betaf/betar,并分别在普通PCR和real-time PCR扩增时对该引物的特异性和灵敏性进行了测定.结果表明该引物对小麦条锈菌特异性高,可稳定扩增出243 bp的目标条带.Real-time PCR的灵敏度为普通PCR的100倍.应用此特异性引物,建立了real-time PCR测定系统,定量测定了条锈菌在小麦叶片接种后组织内的DNA随时间的变化.结果表明,在接种后12 h,可在小麦叶片内检测到条锈菌,且条锈菌在小麦叶片内潜育期间随时间呈指数增长.接种第6 d后叶片内的菌量有明显的增加.建立的小麦条锈菌的real-time PCR早期定量测定方法,为及时、快速监测小麦条锈病在潜育期间的发病规律以及为该病的预测、防治提供依据.