热稳定生物素化荧光素酶的制备及其在焦测序中的应用

• 作者: 周国华 朱术会 武海萍 邹秉杰 陈颖 马寅姣
• 来源期刊: 分析化学
• 学科: 化学
• 关键词: 生物素化荧光素酶 大规模焦测序 生物素羧基载体蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 458-463
• 分类号: O6
• 字数: 4751字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2010.00458

摘要

新一代大规模焦测序技术需要稳定的可固定化的荧光素酶,为了制备热稳定性好且被生物素化的荧光素酶,本研究采用基因工程方法将生物素羧基载体蛋白C端87个氨基酸残基(BCCP87)与荧光素酶在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中进行融合表达,以实现菌体内直接表达生物素化的荧光素酶(BCCP-LUC);并对北美萤火虫(Photinus pyralis)荧光素酶基因进行了定点突变以增强其热稳定性;用链亲和素包被的磁珠对重组融合蛋白进行固定化,用于焦测序.实验结果表明: 突变后的荧光素酶在50 ℃环境中仍具有活性;在43 ℃下10 min活性保留大于80%,热稳定性明显增强.Western blot分析结果表明, 荧光素酶能够在大肠杆菌内生物素化.用链亲和素包被的磁珠结合BCCP-LUC后具有较高活性(2.1×105RLU/μL Beads),经过多次洗涤活性无明显下降.采用微球固定的荧光素酶以及ATP硫酸化酶成功的进行了DNA序列的测定且定量准确,表明固定化的荧光素酶可以应用于焦测序中,为建立高通量大规模芯片焦测序技术提供有效、稳定的工具酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马寅姣	中国药科大学生命科学与技术学院	7	36	4.0	6.0
2	周国华	中国药科大学生命科学与技术学院	42	681	10.0	25.0
6	武海萍	中国药科大学生命科学与技术学院	10	105	6.0	10.0
8	陈颖	中国药科大学生命科学与技术学院	13	154	9.0	12.0
9	邹秉杰	中国药科大学生命科学与技术学院	7	43	4.0	6.0
13	朱术会	中国药科大学生命科学与技术学院	3	19	3.0	3.0