HIV-1 Gag多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的抗体制备

• 作者: 余枫华 刘朝奇 杨凡 柳发勇 覃晓琳 韩莉
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: HIV-1 Gag嵌合基因 蛋白表达 抗体 免疫原性
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 146-149,160
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 3580字
• 语种: 中文

摘要

旨在通过构建Gag的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV诊断及可能的疫苗制备提供试验基础.选定HIV-1 Gag基因中3个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这3个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性, SDS-PAGE和Western blotting测定融合蛋白的表达,并免疫动物制备相应抗体.结果显示,构建的HIV-1 Gag多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长576 bp.在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为27 kD,以包涵体的形式存在.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体IgG.ELISA和免疫荧光方法检测显示制备的多克隆抗体能具有特异性反应.成功构建和高表达了 HIV-1 Gag多表位融合蛋白,纯化蛋白制备的抗体与HIV-1 Gag有特异性结合.为进一步研究HIV-1奠定了试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩莉	三峡大学医学院	52	390	10.0	18.0
2	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
3	杨凡	三峡大学分子生物学研究所	22	47	4.0	6.0
4	柳发勇	三峡大学分子生物学研究所	6	15	2.0	3.0
5	余枫华		24	147	7.0	11.0
6	覃晓琳	三峡大学分子生物学研究所	23	62	4.0	7.0