耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析

• 作者: 侯进慧 刁进进 孙会刚 高兆建
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 嗜热脂肪芽孢杆菌 β-半乳糖苷酶 分离纯化 性质
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 页码范围: 151-156
• 分类号: Q939.97
• 字数: 4171字
• 语种: 中文

摘要

为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化.结果表明:经过系列步骤纯化后,酶纯度提高了54.5倍,回收率20.4%,酶比活力达32.7U/mg.以邻-硝基酚-D-半乳糖吡喃糖苷(ONPG)为底物,研究β-半乳糖苷酶的酶学性质.最适pH6.5,最适作用温度65℃.此菌株产β-半乳糖苷酶在70℃以下和pH4.0～8.0范围内具有较好的稳定性;Mg2+、Mn2+、Fe2+和Co2+对此酶有明显激活作用,而Cu2+、Ag2+、Hg2+几乎完全抑制酶活性.以ONPG为底物酶的Km值为4.32mmol/L.SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得酶蛋白为单肽链蛋白,表观分子质量64kD.因此,嗜热脂肪芽孢杆菌XG24 β-半乳糖苷酶在乳制品工业中具有潜在的应用价值.