利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统在柞蚕蛹中表达增强型绿色荧光蛋白

• 作者: 叶博 岳冬梅 张波 李文利 李树英 王林美 范琦 赵振军
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 柞蚕蛹 核型多角体病毒表达载体系统 增强型绿色荧光蛋白基因 樗蚕培养细胞
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 792-799
• 分类号: S885.1
• 字数: 7442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2010.05.010

摘要

为了探讨外源蛋白在柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达系统的表达水平和稳定性,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到柞蚕核型多角体病毒转移表达载体pApM748BE中,获得重组质粒DNA,与ApNPV DNA共转染樗蚕(Philosamia cynthiam)培养细胞Pc-01后,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-Aph/egfp+.将该重组病毒感染柞蚕蛹,采用SDS-PAGE和Western blot方法检测EGFP在柞蚕蛹中的表达,结果显示:在柞蚕蛹感染重组病毒ApNPV-△ph/egfp+后6 d,EGFP就有明显的表达;感染后12～18 d,蛹体液中的EGFP含量保持较高水平,以EGFP标准样品定量分析EGFP在柞蚕蛹体液中的表达水平高于1 mg/mL;感染后30～39 d仍可以检测到蛹体液中EGFP的表达,而且蛋白稳定.研究结果表明,利用柞蚕核型多角体病毒作表达载体,可在柞蚕蛹中高效稳定地表达EGFP,并且EGFP在雌雄蛹间的表达水平无明显差异.