斑马鱼心脏标志基因TNC多克隆抗体的制备及表达研究

• 作者: 万永奇 吴秀山 夏机良 张义 张湘涛 李永青 江志钢 王跃群 莫小阳 袁婺洲 邓云
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: TNC 融合蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 654-658
• 分类号: Q78
• 字数: 3743字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2010.05.016

摘要

TNC是心脏发育的标志基因,但该基因在斑马鱼中的表达尚未研究.斑马鱼TNC基因基因的开放阅读框含有5132 bp,编码1710个氨基酸,采用生物信息学结合PCR的方法获得了斑马鱼TNC基因的片段.将所得的PCR片段插入原核表达载体pGEX-4T-1中,并将重组质粒(pGEX-4T-1-TNC)转化大肠杆菌B1221;通过IPTG诱导表达GST-TNC融合蛋白,通过尿素洗涤沉淀蛋白并切胶回收纯化融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.Western blot和免疫组化分析表明,制备的抗体具有良好的高效价性和特异性.利用该抗体进行斑马鱼胚胎抗体染色分析表明,TNC蛋白在心脏组织中特异表达.