摘要:
3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是真核细胞的娴酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性酶,具有能量传递等重要功能.家蚕Bombyx mori是重要的变态和能量代谢研究模式动物,为了明确GPDH在家蚕中的作用,本研究根据果蝇lethal(2)k05713的蛋白质序列,从家蚕C108品种克隆了2个完整的mRNA转录体,长度分别为3 456 bp和2 979 bp (GenBank登录号为GQ865685和GQ865686),具有相同的2 166 bp ORF,编码721个氨基酸.克隆拼接了548 bp的第9内含子后,参照大造品种的全基因组数据,推测出BmGpa基因全长27 983 bp(GenBank登录号为EF154335),包含16个外显子和15个内含子.编码蛋白具跨膜螺旋结构,pl为8.22,分子量为80.5 kD,1~20氨基酸区域为信号肽序列.分子同源进化和蛋白质基序分析表明,BmGPD是家蚕中一种新GPDH成员,能在大肠杆菌Escherichia coli中诱导大量表达.RT-PCR分析表明,BmGpd基因表达量在5龄中期最高,在3 d的蛹中明显下调,进入滞育时表达量更低;血液中较低,中肠、丝腺、生殖腺和脂肪体中有大量表达.芯片表达谱显示,5龄第3天幼虫头和体壁中表达丰度最高,脂肪体和马氏管中最低,性别差异不显著.EST表达谱显示,4龄第2天中肠中表达丰度最高.RNAi结果显示,家蚕体内存在BmGpd基因产物代谢补偿途径.本研究为深入研究家蚕GPDH的表达调控以及与变态和能量代谢的关系创造了条件.