人PD1胞外须基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

• 作者: 任东明 刘朝奇 史继静 李斌 覃晓玲
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 人PD1胞外段基因 原核表达 免疫原性 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 23-25
• 分类号: R392
• 字数: 2882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2010.03.023

摘要

目的:研究人PD1的生物学活性,制备人PD1胞外段区域及其特异性抗体.方法:用PCR方法扩增编码人PD1胞外段的基因序列(hPD1 ecr),将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达蛋白用SDS -PAGE和Western blot鉴定.纯化目的蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),流式细胞术检测抗体滴度及其特异性.结果:原核表达载体pET28 a(+)-PD1 ecr成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PD1胞外区蛋经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论:得到纯化的人PD1胞外蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下人PD1蛋白,为进一步研究PD1功能奠

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任东明	三峡大学分子生物学研究所	30	126	7.0	9.0
2	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
3	史继静	三峡大学分子生物学研究所	19	94	6.0	9.0
4	李斌	三峡大学分子生物学研究所	20	89	4.0	9.0
5	覃晓玲	三峡大学分子生物学研究所	1	4	1.0	1.0