环介导等温扩增技术检测蚊体内间日疟原虫子孢子的研究

• 作者: 刘耀宝 周华云 曹俊 朱国鼎 朱韩武 李菊林 王伟明 陶志勇 顾亚萍 高琪
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 环介导等温扩增技术 间日疟原虫 子孢子 蚊媒
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 158-163
• 分类号: R382.31
• 字数: 4571字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2010.02.013

摘要

目的 建立一种简便、快速和高敏感度的蚊体内间日疟原虫检测的环介导等温扩增方法(LAMP).方法 针对间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)基因种属特异性保守区域6个位点设计2对引物,以感染性按蚊、阴性按蚊、恶性疟原虫及正常人血DNA为模板评价LAMP的特异性.将间日疟原虫CSP基因质粒DNA梯度稀释,并与阴性按蚊DNA按1.0μl加1.3×10~6、1.3×10~5、1.3×10~4、1.3×10~3、1.3×10~2、1.3×10~1、1.3×10~0拷贝混合后为模板进行LAMP反应,观察其检测敏感性;将感染性按蚊与阴性按蚊DNA作1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256稀释,然后以稀释样本为模板进行LAMP反应,观察批量检测的敏感性.再用此方法与镜检解剖、巢式PCR同时检测同批次人工感染的67只按蚊,评价其应用价值.结果 此法检测感染性按蚊阳性,对照组均为阴性;检测不同比例稀释的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA混合物,最低可检测1.3×10~2拷贝的间日疟原虫CSP基因质粒DNA与按蚊DNA的混合物;检测不同比例感染按蚊与阴性按蚊DNA混合样本,最低可检测出在128个按蚊中有1个感染按蚊的混合样本;用此法检测67只同批次人工感染的按蚊,检出率为47.76%,解剖镜检检出率为25.37%(X~2=7.24,P<0.01),巢式PCR检出率为40.30%(X~2=0.73,P>0.05).以镜检解剖作为金标准,LAMP敏感性为100%,巢式PCR敏感性为100%.结论 LAMP检测蚊体内间日疟原虫简便、快速、敏感性高,具有广阔的应用前景.