重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究

• 作者: 刘景晶 曹荣月 杨亚男 鲁勇
• 来源期刊: 西北药学杂志
• 关键词: 基因工程 重组人胰岛素 纯化 磺酸化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 药剂
• 页码范围: 206-208
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-2407.2010.03.024

摘要

目的 对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-IHI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法 对包涵体蛋白纯化复性的工艺.方法 工程菌pET28a-IHI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干爆,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验.结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg.结论 该工艺耗时短,效果好,成本较低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘景晶	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室	116	553	12.0	18.0
2	曹荣月	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室	61	129	6.0	8.0
3	鲁勇	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室	8	12	2.0	3.0
4	杨亚男	中国药科大学生命科学与技术学院微基因药学实验室	1	0	0.0	0.0