HSV-tk和H60基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 卢善明 薛玲 邓汪东
• 来源期刊: 汕头大学医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 自杀基因 NKG2D配体 载体构建 逆转录病毒科
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 25-28
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3277字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带自杀基因HSV-tk和免疫相关基因H60的逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60.方法:以质粒pUC19-H60为模板,用PCR方法扩增H60基因,并亚克隆至pMD18-T载体,构建中介载体pMD18-H60.双酶切质粒pMD18-H60和tgCMV/HyTK,获得H60和TK基因片段,再克隆至逆转录载体pIRES,构建重组载体pIRES-H60和pIRES-TK.然后把H60基因片段克隆至载体pIRES-TK,构建重组载体pTK-IRES-H60.转染重组载体至包装细胞PA317进行病毒包装,用病毒液感染NIH3T3细胞,检测病毒液的滴度.结果:测序结果显示PCR扩增的H60基因序列正确,重组载体经PCR和酶切鉴定得到相应的基因片段.经筛选得到稳定的产病毒细胞株PA317/pIRES-H60、PA317/pIRES-TK和PA317/pTK-IRES-H60,病毒滴度分别为8×104、1×105、7.1×104cfu/mL.结论:成功构建逆转录病毒载体pIRES-H60、pIRES-TK和pTK-IRES-H60,建立了稳定的病毒细胞株,所产生的假病毒颗粒具备一定的感染力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛玲	中山大学附属第一医院病理科	47	231	8.0	12.0
2	卢善明	汕头大学医学院第一附属医院病理科	16	47	4.0	6.0
3	邓汪东	汕头大学医学院第一附属医院泌尿外科	15	35	4.0	5.0