茶树简化EcoTILLING技术的建立

• 作者: 姚明哲 王新超 金基强 陈亮 马春雷
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 CELⅠ EcoTILLING SNP
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学
• 页码范围: 19-26
• 页数: 8页
• 分类号: S571.1|Q55
• 字数: 4978字
• 语种: 中文

摘要

EcoTILLING(Ecotype Targeting Induced Local Lesions IN Genomes)可快速检测自然群体中的SNP(Single Nucleotide Polymorphism)等DNA变异.第一次建立了简化的茶树EcoTILLING技术体系:首先筛选扩增目的基因的特异PCR引物;然后通过CELⅠ酶切PCR产物优化实验,确定酶切时间20 min、10×buffer组成为250 mmol/L Tris-HCl(pH7.4)、150 mmol/L KCl、15 mmol/L MgSO_4、4 μg/mL BSA和0.04% Triton x-100,反应温度为47.5℃,酶量为1.8 μL CJE(Celery Juice Extract)/10 μL反应体系时,酶切的谱带信号较强、特异性高;初步确定合适的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测条件为凝胶浓度5%、上样量4～5 (L、有效分离长度要达到15 cm.利用上述简化的EcoTILLING对6份茶树种质870 bp的PPO基因片段实现了分型,经测序验证酶切产生的谱带与6份种质内部或不同种质间的SNP位置吻合.