莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库的构建和鉴定

• 作者: 徐来祥 曲志才 李付美 闫顺
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 莱芜猪 肝脏 cDNA文库 SMART技术
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 397-400
• 分类号: Q78
• 字数: 3663字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.023

摘要

目的:构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因.方法:采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMA SPIN-400柱分级分离后,收集500 bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小.结果:经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105 cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2 kb,平均插入片段长度大于1 kb.结论:建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐来祥	曲阜师范大学生命科学学院	95	654	12.0	22.0
2	曲志才	曲阜师范大学生命科学学院	26	123	6.0	10.0
3	李付美	曲阜师范大学生命科学学院	2	7	2.0	2.0
4	闫顺	曲阜师范大学生命科学学院	2	7	2.0	2.0