豌豆肌动蛋白异型体PEAc3的原核表达及其聚合特性分析

• 作者: 刘国琴 刘曦 张少斌
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 豌豆 肌动蛋白 异型体 诱导表达 聚合特性分析
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 1-6
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

植物肌动蛋白在植物顶端生长、细胞分裂分化和细胞信号转导等多种生命活动中发挥着重要作用.豌豆中存在多种肌动蛋白异型体.研究豌豆肌动蛋白异型体PEAc3与组氨酸标签(His-tag)及绿色荧光蛋白(GFP)的融合表达,并分析了融合蛋白的聚合特性.采用RT-PCR的方法克隆PEAc3基因,构建原核表达载体pET30a-His-PEAc3-GFP.用DNAman生物学软件分析表明,PEAc3融合蛋白全长675个氨基酸,分子量74.74 ku,等电点5.81.将pET30a-His-PEAc3-GFP转入大肠杆菌BL21中,优化的诱导表达条件为:25℃,当菌液OD600达到0.8时加入IPTG(浓度0.1 mmol/L),诱导表达4 h.采用尿素变性复性、镍柱亲和层析的方法从包涵体中纯化获得高纯度融合蛋白.融合蛋白His-PEAc3一GFP能够体外聚合,聚合临界浓度为0.5 μmol/L.单体His-PEAc3-GFP对DnaseⅠ有抑制作用,聚合后对肌球蛋白Mg-ATPase活性有一定的激活作用.上述结果表明,原核表达的His-PEAc3-GFP可能具有类似于一般肌动蛋白的聚合特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘国琴	中国农业大学植物生理生化国家重点实验室	22	309	7.0	17.0
2	张少斌	沈阳农业大学生物科学技术学院	62	475	13.0	19.0
3	刘曦	沈阳农业大学生物科学技术学院	5	42	2.0	5.0