团头鲂促性腺激素GtH Ⅱβ亚基基因5'端启动子区克隆及表达载体构建

• 作者: 周正峰 尚晓莉 崔严慧 张勇 张开岳 曲学伟 曲宪成 程翠 胡萍华 蒋骄云 金一春
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 团头鲂 促性腺激素Ⅱβ亚基 5'侧翼序列 启动子 表达载体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 649-658
• 分类号: Q959|S96
• 字数: 7281字
• 语种: 中文

摘要

利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Ⅱβ(GtHⅡβ)亚基基因5'端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体.序列分析结果显示:克隆得到的GtHⅡβ亚基基因5'端侧翼序列长度为1 354 bp,其中包括TATA盒、ERE、ARE、PRE、GRE、LHX3、SF-1、Sp1、Pit-1、NF-Y和AP1等可能对GtHⅡβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点;转录起始位点位于-40～10 bp.进一步利用PCR方法扩增得到了811 bp(-771～+40bp)、601 bp(-561～+40bp)、386bp(-346～+40bp)、239bp(-199～+40 bp)和98 bp(-58～+40 bp)的5个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtHⅡβ亚基基因5'端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础依据.