小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 张雅林 徐红星 王敦 陈东旭
• 来源期刊: 环境昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小菜蛾 GOBP2 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 194-198
• 分类号: Q966
• 字数: 4237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-0858.2010.02.008

摘要

本实验提取羽化3 d的小菜蛾Plutella xylostella成虫触角总RNA,反转录合成cDNA,以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因,大小为492 bp,Blast结果显示与多种昆虫的GOBP2具有较高的同源性.将该基因克隆到表达载体pMAL-c4E中,转化宿主菌TB1(DE3),获得单克隆重组质粒pMAL-c4E-GOBP2.IPTG成功诱导pMAL-c4E-GOBP2表达出约60 kDa的融合蛋白.优化诱导条件为3 mmol/L终浓度IPTG、6 h,可获得大量可溶性蛋白.表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.ELISA分析表明制备的抗体效价达1:1.28×105.