米黑根毛霉脂肪酶的克隆表达及发酵条件优化

• 作者: 张宇 杨博 赵继伦
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 米黑根毛霉 脂肪酶 分泌表达 毕赤酵母 发酵优化
• 年，卷（期）: 2010,（35）
• 页码范围: 19910-19913,19948
• 分类号: S188
• 字数: 5530字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.35.012

摘要

米黑根毛霉脂肪酶RML是一种重要的工业用酶,具有非常广泛的应用前景.本研究将人工合成的RML基因rml克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-rml诱导型表达载体.表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,并使用抗生素G418筛选、三丁酸甘油酯-MM板及PCR方法筛选阳性重组工程菌.工程菌发酵液经SDS-PAGE分析、三丁酸甘油酯板鉴定,表明脂肪酶RML在毕赤酵母中获得高效表达,且蛋白分子大小与预期一致.进一步优化了发酵条件,包括对培养基组分、诱导剂浓度和发酵温度等的优化.优化后的培养基组成为:甘油4.0%,(NH4)2SO4 5.000 g/L,CaSO4 0.465 g/L,K2SO4 9.100 g/L,MgSO4·7H2O 7.450 g/L;培养条件为:pH值6.0,生长阶段温度30 ℃,诱导阶段采用22 ℃低温诱导,诱导期每24 h补加甲醇浓度为3%.优化后,发酵液中的RML活力最高达到116 U/ml,比优化前提高了3.14倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张宇	华南理工大学生物科学与工程学院	33	401	10.0	19.0
2	杨博	华南理工大学生物科学与工程学院	144	1430	22.0	30.0
3	赵继伦	华南理工大学生物科学与工程学院	13	109	6.0	10.0