人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化

• 作者: 万晓姗 张耀方 李校堃 杨苹 王会岩 田海山 肖业臣 赵宏鑫 邵明龙
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 成纤维细胞生长因子21 pET-20b 小泛素相关修饰蛋白质类
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据.方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达.将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上.结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19 401,与理论预期值相符.Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白.结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白.