人巨细胞病毒潜伏相关IL-10基因克隆及体外表达

• 作者: 冯晶晶 吕建新 姜招嫦 季敬璋 曾智 李祥 郑晓群
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 人巨细胞病毒 潜伏 白细胞介素-10 克隆 体外表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 422-428
• 页数: 7页
• 语种: 中文

摘要

为了研究人巨细胞病毒潜伏相关白细胞介素-10(LA-cmvIL-10)及巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)在病毒感染中的作用,构建了cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因的原核及真核表达体系.从患儿尿液标本中提取病毒DNA,应用重叠延伸PCR扩增cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子,产物克隆至原核表达载体pMal-c2x和真核表达载体pCDNA3.1上,测序显示扩增的cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子包含了完整的编码区;重组的原核表达质粒pMal-c2x-cmvIL-10和pMal-c2x-LAcmvIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在受体菌内表达目的蛋白.将表达产物免疫家兔,获得特异性抗血清.真核表达载体pCDNA3.1-cmvIL-10和pCDNA3.1-LAcmvIL-10转染Hela细胞,经Western blot鉴定与设计相符.